Immunológiai és metabolikus válaszok a Basti elhízás terápiás lefolyására

Urmila Thatte

Klinikai Farmakológiai Osztály, Seth GS Orvosi Főiskola és KEM Kórház, Mumbai, India

Shubhada Chiplunkar

* Chiplunkar laboratórium, Fejlett Rákkezelési, Kutatási és Oktatási Központ (ACTREC), Tata Emlékközpont, Mumbai, India

Supriya Bhalerao

** Klinikai Farmakológiai Osztály, TNMC és BYL Nair Jótékonysági Kórház, Mumbai, India

Aditi Kulkarni

† Kayachikitsa osztály, MA Podar Ayurvédikus Kórház, Mumbai, India

Raman Ghungralkar

† Kayachikitsa osztály, MA Podar Ayurvédikus Kórház, Mumbai, India

Falguni Panchal

** Klinikai Farmakológiai Osztály, TNMC és BYL Nair Jótékonysági Kórház, Mumbai, India

Shamal Vetale

* Chiplunkar laboratórium, Fejlett Rákkezelési, Kutatási és Oktatási Központ (ACTREC), Tata Emlékközpont, Mumbai, India

Pradeep Teli

* Chiplunkar laboratórium, Fejlett Rákkezelési, Kutatási és Oktatási Központ (ACTREC), Tata Emlékközpont, Mumbai, India

Dipti Kumbhar

** Klinikai Farmakológiai Osztály, TNMC és BYL Nair Jótékonysági Kórház, Mumbai, India

Renuka Munshi

** Klinikai Farmakológiai Osztály, TNMC és BYL Nair Jótékonysági Kórház, Mumbai, India

Absztrakt

Háttér és célok:

A Basti (gyógyhatású beöntés) egy népszerű ájurvédikus beavatkozás, amelyet elhízás esetén ajánlanak. Nincs azonban adat arra vonatkozóan, hogy fiziológiai vagy biokémiai változások történnek-e e kezelés után. Ezt a vizsgálatot elhízott egyének immunológiai és metabolikus változásainak azonosítására végezték el a Basti terápiás kezelése után.

Mód:

Harminckét elhízott egyén (18 és 60 év), testtömeg-indexe (BMI) ≥30 kg/m 2, akik 16 beöntésből álló terápiás kezelést kaptak (Basti), amelyet egy speciális étrend és életmód követett 32 napig. elhízás kezelésüket bevonták a vizsgálatba. A klinikai vizsgálatot, az immun- és metabolikus markerek mérését (S1) előtt, közvetlenül (S2) után és 90 nappal a terápia befejezése után (S3) végeztük.

Eredmények:

Jelentős csökkenés (P Kulcsszavak: Basti, immunológiai markerek, metabolikus markerek, elhízás, Panchakarma

Az elhízást az Egészségügyi Világszervezet (WHO) 1 úgy határozza meg, hogy a testtömeg-index (BMI) legalább 30 kg/m 2. A 2., 3. és 2. típusú szív- és érrendszeri betegségek megnövekedett kockázatával jár együttes metabolikus rendellenességek miatt, beleértve az éhomi glükóz károsodását, a hiperinsulinaemiát és a dyslipidaemiát (alacsony HDL-szint és magas plazma trigliceridszint jellemzi) 4. A nem megfelelő tápanyagbevitel és/vagy a tápanyagok anyagcseréjének változásai miatt a növekvő zsírtartalom az alacsony mikrotápanyag-szinttel is összefügg. Az elhízás egyik jellemzője az oxidatív stressz és az alacsony fokú gyulladás keringő markereinek növekedése, amelyet a keringő C-reaktív fehérje (CRP) és/vagy más gyulladásos citokinek, például a tumor nekrózis faktor alfa (TNF-α) és interleukin-6 (IL-6) 6, 7. Az adipocitokinek, mint például a TNF-a vagy az IL-6, szintén a 8, 9 fokozott adipozitással emelkednek, és szorosan korrelálnak az ismert gyulladásos marker 10 CRP-vel .

Az életmódváltás, az étrend és a rendszeres testmozgás határozott előnyein kívül különféle farmakológiai beavatkozásokat korlátozott sikerrel vizsgáltak. Például az orlisztát, amelyet 11 elhízás esetén engedélyeztek, mérsékelt, 2,9 kg-os testsúlycsökkenéshez vezet 1 és 4 év után, és alkalmazása számos gyomor-bélrendszeri mellékhatással jár 12. A rendkívül elhízott, megállapított szövődményekkel küzdő beteg számára a műtét lehet a legmegfelelőbb beavatkozás, és életmentő lehet 13. Költsége és a szövődmények kockázata miatt azonban továbbra is más hatékony és biztonságos kezelések után kutatnak. Az alternatív terápiákat széles körben alkalmazzák az előny vagy a biztonság szükséges bizonyítéka nélkül is.

Az ajurvéda, az indiai hagyományos orvoslás rendszere a Basti-t (gyógyszeres beöntés) számos rendellenesség, különösen életmódbeli rendellenesség, köztük az elhízás beavatkozásaként írta le 14 Az ájurvédikus szövegek leírják a Basti-terápia javallatait és ellenjavallatait 15. Ennek ellenére egyetlen tanulmány sem kísérelte meg dokumentálni a biztonságosságát és azt, hogy ennek a beavatkozásnak van-e hatása elhízott egyénekre. Adatok hiányában annak kimutatására, hogy fiziológiai vagy biokémiai változások történnek-e a kezelés után, ezt a tanulmányt azért végeztük, hogy megvizsgáljuk az immunológiai és metabolikus változókat elhízott egyéneknél a Basti terápiás folyamata után.

Anyag és módszerek

Harminckét egymást követő, az indiai Mumbai-i MA Podar Ayurvédikus Kórház Belgyógyászati Klinikáján (OPD) az elhízás kezelésére járó beteget hívták fel, hogy vegyenek részt ebben a vizsgálatban. Az 18 és 60 év közötti korcsoportba tartozó betegeket, akiknek BMI-értéke ≥ 30 kg/m2, a derék-csípő aránya férfiaknál ≥ 1,0, nőknél pedig ≥ 0,9, felkérték, hogy vegyenek részt a vizsgálatban, miután megkapják írásbeli beleegyezésüket. Súlyos szív-, légzőszervi, máj- és veseelégtelenségben szenvedő akut betegeket, valamint a terhes vagy szoptató nőket kizárták a vizsgálatból. A tanulmány a 2007 augusztusa és 2010 decembere közötti időszakban készült.

Mivel ez egy hipotézis volt, amely bizonyította a koncepciót, ahol azt kívántuk megvizsgálni, hogy változtak-e az anyagcsere és az immunparaméterek azoknál a betegeknél, akik elhízás terápiájaként kapták a Basti-t, a legalább 30 betegből álló minta nagyságát megfelelőnek tartották az elemzéshez.

A részvételhez való írásos beleegyezéses beleegyezés után minden egyes egyénről részletes klinikai előzményeket vettünk, és elvégeztük a vonatkozó fizikai vizsgálatokat, ideértve a súly rögzítését és az antropometriai adatok, például a derék-csípő arány, a felkar kerület és a has kerületének mérését. Vérmintát (45 ml) aszeptikusan gyűjtöttünk az ante-cubitalis vénából, és dolgoztuk fel különböző metabolikus és immunológiai paraméterek mérésére. A vizsgálati protokollt a mumbai MA Podar Ayurvédikus Kórház intézményi etikai bizottsága hagyta jóvá.

A mintákat a klinikai helyen kódolták és laboratóriumba küldték. A kiindulási vérminta (S1) összegyűjtése után megkezdték a 16 Bastis előírt terápiás menetét szabályos mintázatban, a Charak Samhita (más néven kala basti 15) ismertetéssel.

Az 1. napon 240 ml szezámolajjal ellátott Anuvasan Basti-t (olaj beöntés) adtunk az anális csatornán keresztül fecskendő és gumikatéter segítségével. Másnap Asthapana Basti (beöntés főzettel), amely farok 120 ml-t, Triphala kwatha-t (Terminalia belerica, Terminalia chebula és Phyllanthus emblica főzet) -700 ml, tehénvizelet -150 ml, mézet 10 g és 10 g fekete sót tartalmazott. beadni. Ezt az alternatív Anuvasana és Asthapana Basti kúrát hatszor, majd Anuvasan Basti négyszer adták be egymást követő napokon. A tanfolyam során minden résztvevőt megfigyeltek az Anuvasana Basti és az Asthapana Basti napi megfelelő, nem megfelelő vagy túlzott hatásainak tüneteiről.

A 16 napos tanfolyam befejezése után a résztvevőknek olyan étrendet ajánlottak, amelyek könnyen emészthetők, például khichadi, moong dal, roti, és arra kérték őket, hogy kerüljék a sült és szénhidrátban gazdag ételeket, hideg italokat stb. . Felkérték őket arra is, hogy változtassák meg életmódjukat (pl. A hosszabb ideig tartó ülést és állást, a túlzott/hangos beszédet, a megerőltető hosszú távú utazást/gyalogolást, a nappali alvást, a természetes késztetések elfojtását, a szexet, a szellő túlzott expozícióját, a napfényt., füst, por, nem megfelelő vastagságú párna használata stb.) 32 napig az Ayurveda ajánlásai szerint 15. Ezen időszak végén Basti menetét befejezettnek tekintették. A klinikai vizsgálatot és a vérvizsgálatokat megismételték (S2) ezen a ponton, mint az alapvizitornál.

A végső vérmintát (S3) 90 nappal az S2 után, klinikai vizsgálattal együtt vettük fel annak értékelésére, hogy a Basti hatása fennmaradt-e. Ebben az időszakban nem javasoltak étrend- vagy életmódbeli módosításokat vagy súlykontrollra szolgáló gyógyszereket. Így a résztvevőt összesen 138 napig figyelték, miután felvették a vizsgálatba. Az 1. minta (S1) összegyűjtésének napját 0. napnak neveztük, az S2-et a 48. napon (16 Basti-nap és 32 napos életmód- és étrend-korlátozás), az S3-at pedig a 138. napon gyűjtöttük össze. Antropometriai paraméterek, például súly, BMI, derék- a csípő arányát, a felkar és a has kerületét az S1, S2 és S3 gyűjtések idején mértük.

A perifériás vér limfocitáinak (PBL) izolálását a heparinizált perifériás vénás vérből Ficoll-Hypaque (Sigma-Aldrich, USA) centrifugálási módszerrel végeztük 17 .

A perifériás vér limfocitáinak (PBL-ek) immunfenotipizálása: A PBL-eket phikoeritrinnel (PE) jelölt egér anti-humán monoklonális antitestekkel (MAb) inkubáltuk CD3, CD4, CD8, CD14, CD19, CD56, CD80, CD86, CD209, CD11c, αβ ellen. -T-sejt receptor (TCR) és γδ-TCR (BD Pharmingen, USA) a felület festésére a gyártó utasításai szerint. Az aktivációs markereket kettős színáramú citometriával értékeltük. A PBL-eket fluorokróm konjugált monoklonális antitestekkel festettük az aktivációs markerek ellen, mint például a fluoreszcein-5-izotiocianát (FITC) konjugált CD25, CD69, CD71 és PE-konjugált HLA-DR (BD Pharmingen, USA) és tovább inkubáltuk FITC vagy PE konjugált egér anti- humán monoklonális antitest, amely a CD3 ellen irányul. Minden kísérletben megfelelő izotípus kontrollokat alkalmaztunk. A PBL-eket FACSCalibur áramlási citométeren (Becton Dickinson, USA) szereztük be. Az adatokat CellQuest szoftverrel (Becton Dickinson, USA) elemeztük.

Az intracelluláris kalcium felszabadulás becslése: A PBL-eket (1x106/ml 0,01 M PBS) 5 µM Fluo-3-AM-mal töltöttük 30 percig 37 ° C-on. 1 µg anti-CD3 MAb-ot adtunk stimulánsként, és a fluoreszcencia intenzitását azonnal megmértük a FACSCalibur áramlási citométeren, hogy meghatározzuk az intracelluláris kalcium felszabadulást különböző időpontokban, a korábban leírtak szerint 18 .

Intracelluláris reaktív oxigénfajták mérése limfocitákban: A reaktív oxigénfajok (ROS) szintjét PBL-ben 2 ’, 7’ diklór-fluoreszcein-diacetát (DCFH-DA) festékkel (Sigma, USA) mértük. A PBL-eket 4 μM festékkel töltöttük be, és 30 percig inkubáltuk 37 ° C-on. Stimulánsként anti-CD3 MAb-t (1 μg) adtunk hozzá, és az átlagos fluoreszcencia intenzitás növekedését 0-ról 45 percre mértük, a korábban leírtak szerint 19. Az elemzést a Cell Quest szoftver segítségével hajtottuk végre, és az eredményeket átlagos fluoreszcencia intenzitásként (MFI) fejeztük ki.

A limfociták forgalma az Annexin FITC festéssel: A PBL-eket felületi festés céljából PE-jelölt egér anti-humán monoklonális antitestekkel inkubáltuk CD3 és CD19 ellen (BD Pharmingen, USA). A limfociták forgalmát (apoptózist) tovább monitoroztuk az Annexin V FITC (BD Pharmingen, USA) festési módszerrel, a gyártó útmutatásai szerint, és a Cell Quest szoftverrel elemzett adatokkal.

Limfocita-proliferációs vizsgálat: A PBL-ekben a proliferatív válaszokat tríciumos timidin beépülési vizsgálattal elemeztük a 20. standard protokoll szerint. Stimulánsként anti-CD3 MAb-t (1 ug) használtunk. A triidizált timidin beépülését folyékony béta szcintillációs számlálóban (Model 1900, Packard, USA) mértük percenként számítva (cpm). A stimulációs indexet (S.I.) az anti-CD3 MAb-vel stimulált tenyészetek átlagos cpm arányának és a nem stimulált tenyészetek arányaként számoltuk ki.

Citokin és immunglobulin ELISA: A PBL-eket (1,5x10 5/200 µl cRPMI/üreg) 1 ng anti-CD3 MAb-vel stimuláltuk 48 órán át 37 ° C-on. Sejtmentes felülúszókat gyűjtöttünk, és elemeztük a szekretált citokinek gamma-interferonját (IFN-y), interleukin (IL) -10, IL-4, IL-8, TNF-a, IL-6 és IL-1α-t Opt-EIA szendvics segítségével. ELISA készlet (BD, Biosciences, USA) a gyártó utasításainak megfelelően. A szérummintákat szintén elemeztük a fent említett citokinek tekintetében ugyanazon kitek felhasználásával.

Az elhízott személyek szérummintáinak immunglobulin-, IgG- és IgM-szintjét az IgG és IgM detektáló készlet segítségével (Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, TX, USA) mértük a gyártó ajánlásai szerint.

Citotoxicitási vizsgálat: A limfociták citotoxicitását 51 Cr-kibocsátási vizsgálattal követtük nyomon. A PBL-eket (effektorokat) 51 Cr-jelzéssel ellátott K562 célponttal (5000 sejt/lyuk) együtt tenyésztettük az effektorban az E: T-sejtek 40: 1 arányához viszonyítva 4 órán át 37 ° C-on, a 21. protokoll szerint. A citotoxikus aktivitás százalékát a következő képlettel számoltuk:% fajlízis = (minta cpm - spontán cpm)/(maximális cpm - spontán cpm) × 100.

A teljes vérképet (CBC) SYSMEX KX-21 hematológiai analizátoron (Sysmex Corporation, Kobe, Japán) végeztük, az eritrocita ülepedési sebességet (ESR) Westergren módszerrel 22 .

Böjt vércukorszint, májfunkciós tesztek [szérum bilirubin, szérum alanin transzamináz (ALT), aszpartát transzamináz (AST) alkalikus foszfatáz (ALP), γ-glutamil transzferáz GGT], vesefunkciós tesztek (vér karbamid-nitrogén, szérum kreatinin, fehérje, albumin és húgysav), ásványi anyagokat (szérum kalcium, foszfor, vas és réz), lipidprofilt (szérum koleszterin, trigliceridek, HDL-koleszterin és LDL-koleszterin) standard biokémiai készletekkel (AMP Diagnostics, Ausztria) elemeztek egy teljesen automatizált biokémiai analizátor (Biochemical Systems International SRL, Olaszország). Az éhomi inzulint, a B12-vitamint és az endokrin markereket (T3, T4, TSH, kortizol) szabványos radioimmunassay-készlettel (Shinjin Medics Inc., Dél-Korea) mértük. A homeosztatikus modell értékelése - inzulinrezisztencia (HOMA-IR) indexet a [Cukor (mmol/l) x inzulin]/22,5 képlet segítségével számoltuk. A glikozilezett hemoglobint és a magas érzékenységű (hs) -CRP-t Nycocard Reader (Axis Shield, Norvégia) alkalmazásával mértük. Az A-vitamin szintjét standard HPLC készlet segítségével (Recipe Chemicals, + Instruments, GmBH Germany) mértük. A ferritinszinteket standard ELISA készletekkel mértük (Calabasas, CA, USA).

A minőség biztosítása érdekében mind a belső, mind a külső minőségellenőrzési mintákat (amelyeket az Christian Christian College-tól (az indiai Vellore és a BIO RAD, USA) szereztük be) dolgoztuk fel. Az anyagcsere-adatok integritásának fenntartása érdekében a paraméterek elemzéséhez beszerzett összes készletet a vizsgálat során állandó értéken tartottuk.