Amerikai Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatal

Szerzői: Sandra Tallent, Jennifer Hait, Reginald W. Bennett (ret.) És Gayle A. Lancette (ret.)

staphylococcus

Módosítási előzmények:

  • 2016. március: Az S. aureus inkubálásának hőmérsékletét 35 ° C-ról 35-37 ° C-ra változtatták.

A S. aureus kimutatására és felsorolására használt módszerek az élelmiszer tesztelésének okaitól és a vizsgálati anyag múltjától függenek. A feldolgozott élelmiszerek viszonylag kis számban tartalmazhatnak legyengült életképes sejteket, amelyek jelenlétét megfelelő eszközökkel kell bizonyítani. A S. aureus élelmiszerének elemzése jogi lépésekhez vezethet a szennyezett élelmiszerért felelős fél vagy felek ellen. Ebben a fejezetben bemutatjuk a S. aureus elemzési módszereit, amelyeket közösen tanulmányoztunk, és amelyek alkalmasnak bizonyultak az FDA követelményeihez szükséges információk nyújtására.

Jelentős vita merült fel a koaguláz teszt olvasásának jelentőségéről és helyes módszeréről. A kutatási eredmények azt mutatták, hogy az 1+, 2+ és 3+ reakciók által képviselt gyenge koaguláz aktivitás ritkán felel meg a S. aureus (4) egyéb kritériumainak. A kortársak konszenzusa megállapította, hogy a S. aureus megkérdőjelezhetetlen azonosításához 4+ koaguláz reakcióra van szükség. Azokat a törzseket, amelyek 4+ alatti koagulázreakciók alapján gyaníthatóan S. aureusnak bizonyulnak, más vizsgálatokkal, például anaerob glükóz fermentációval, lizosztafin érzékenységgel és termonukleáz termeléssel kell megerősíteni. A gyarmati morfológia vizsgálatait Baird-Parker agarral, lizosztafin érzékenységgel, koaguláz és termonukleáz termeléssel, valamint glükóz és mannit fermentációval végeztük 100 enterotoxigén és 51 nementerotoxigén S. aureus törzsön (3). Az enterotoxigén és a nementerotoxigén törzsek reakciói minden esetben legfeljebb 12% -kal változtak. Ez a kutatás azt jelzi, hogy ezeknek a teszteknek egyikére sem lehet hivatkozni a toxikus és nem toxikus staphylococcusok megkülönböztetésében.

Közvetlen lemezszámolási módszer

Ez a módszer olyan élelmiszerek elemzésére alkalmas, amelyekben 100 g/g-nál több S. aureus sejt várható. Megfelel a ref. 1.

Berendezések és anyagok

  1. Ugyanaz az alapfelszerelés, mint a hagyományos lemezszámnál (3. fejezet).
  2. Szárítószekrény vagy inkubátor az agarlemezek felületének szárításához
  3. Steril hajlított üvegcsíkok, jégkorongbot vagy kapa alakú, tűzcsiszolt végekkel, 3-4 mm átmérőjű, 15-20 cm hosszúak, szögletes terítési felületükkel 45-55 mm hosszúak

  1. Baird-Parker táptalaj (M17)
  2. Triptikáz (triptikus) szója agar (TSA) (M152)
  3. Agyszív infúzió (BHI) húsleves (M24)
  4. Koaguláz plazma (nyúl) EDTA-val
  5. Toluidin-kék-DNS agar (M148)
  6. Lysostaphin (Schwartz-Mann, Mountain View Ave., Orangeburg, NY 10962)
  7. Tripton élesztő kivonat agar (M165)
  8. Paraffinolaj, steril
  9. 0,02 M foszfát-sóoldat (R61), 1% NaCl-ot tartalmaz
  10. Kataláz teszt (R12)
  • A minta előkészítése (lásd a BAM 1. fejezetét).

    A S. aureus izolálása és felsorolása

    Vigyük át a S. aureus gyanús gyarmatokat 0,2-0,3 ml BHI húslevest tartalmazó kis csövekbe, és alaposan emulgeáljuk. Inokuláljunk megfelelő karbantartó tápközeg, például TSA agar ferdeségét huroknyi BHI szuszpenzióval. Inkubálja a BHI tenyészet szuszpenzióját és ferde szögeit 18-24 órán át 35-37 ° C-on. Tartsa a ferde tenyészetet szobahőmérsékleten a kiegészítő vagy ismételt vizsgálatokhoz abban az esetben, ha a koaguláz-teszt eredményei megkérdőjelezhetők. Adjon 0,5 ml elkészített koaguláz plazmát EDTA-val (B-4, fent) a BHI tenyészethez, és alaposan keverje össze. Inkubáljuk 35-37 ° C-on, és periodikusan 6 órán át vizsgáljuk meg az alvadék képződését. Csak az a szilárd és teljes vérrög tekinthető pozitívnak a S. aureus esetében, amely a cső megdöntésekor vagy megfordításakor van. A részleges alvadást, korábban 2+ és 3+ koagulázreakciókat tovább kell vizsgálni (4). Tesztelje az ismert pozitív és negatív tenyészetet egyidejűleg ismeretlen koaguláz aktivitású gyanús tenyészetekkel. Az összes gyanús tenyésztést Gram-reagenssel megfestjük és mikroszkóppal figyeljük meg. Egy latex agglutinációs teszt (AUREUS TEST TM, Trisum Corp., Taipei, Tajvan) helyettesíthető a koaguláz teszttel, ha gyorsabb eljárásra van szükség.

    1. táblázat: S. aureus, S. epidermidis és mikrococcusok jellemző jellemzői (a)

    Jellemző S. aureus S. epidermidis Micrococci Kataláz aktivitás Koaguláz termelés Termonukleáz előállítás Lizosztafin érzékenység A glükóz anaerob felhasználása mannit
    + + +
    + - -
    + - -
    + + -
    + + -
    + - -
    a +, A legtöbb (legalább 90%) törzs pozitív; -, a legtöbb (legalább 90%) törzs negatív.

    A legvalószínűbb számmódszer a Staphylococcus spp.

    A legvalószínűbb szám (MPN) módszert (2) ajánlják azoknak a termékeknek a rutinszerű felügyeletéhez, amelyekben kis mennyiségű S. aureus várható, és olyan ételekben, amelyek várhatóan nagy számú versenytárs fajot tartalmaznak.

    1. Felszerelés és anyagok - Ugyanaz, mint a fenti lemezszámlálási módszer esetében.
    2. Táptalaj és reagensek - Ugyanaz, mint a fenti lemezszámlálási módszer esetében. Ezenkívül: 10% NaCl-ot és 1% nátrium-piruvátot (M154a) tartalmazó triptikáz (triptikus) szójaleves (TSB).
    3. A minta előkészítése - Ugyanaz, mint a fenti lemezszámlálási módszer esetében.

    Az MPN meghatározása

    Inokuláljon 3 csövet 10% NaCl-ot és 1% nátrium-piruvátot (fent, B) tartalmazó TSB-t, mindegyik minta 1 ml-es tizedes hígításával. A legnagyobb hígításnak negatív végpontot kell adnia. Inkubálja a csöveket 48 ± 2 órán át 35-37 ° C-on. 3 mm-es hurkot használva vigyünk át 1 hurkot minden csőből a növekedés (zavarosság) alapján a megfelelően szárított felületű Baird-Parker táptalaj lemezére. Keverje össze a csöveket csíkozás előtt, ha a növekedés csak a csövek alján vagy oldalán látható. Csíkos oltóanyag izolált telepek előállításához. Inkubálja a lemezeket 48 órán át, 35-37 ° C-on. Minden egyes növekedést mutató lemezről legalább 1 S. aureus gyanújú kolóniát vigyünk át a BHI táptalajba (lásd fent D és E a közvetlen lemezszám-módszerről). Folytassa az S. aureus azonosításának és megerősítésének eljárását (E és F, közvetlen lemezszám, fent). Jelentsük az S. aureus/g-t MPN/g-ként, a 2. függelék, MPN meghatározása táblázatok szerint.

    Hivatkozások

    1. AOAC NEMZETKÖZI. 1995. Hivatalos elemzési módszerek, 16. kiadás, sec. 975.55. AOAC INTERNATIONAL, Arlington, VA.
    2. AOAC NEMZETKÖZI. 1995. Hivatalos elemzési módszerek, 16. kiadás, sec. 987.09. AOAC INTERNATIONAL, Arlington, VA.
    3. Bennett, R.W., M. Yeterian, W. Smith, C.M. Coles, M. Sassaman és F. D. McClure. 1986. Staphylococcusaureus azonosítási jellemzők és enterotoxigenitás. J. Food Sci.51: 1337-1339.
    4. Sperber, W. H. és S. R. Tatini. 1975. A tubus koaguláz teszt értelmezése a Staphylococcusaureus azonosítására. Appl. Microbiol.29.: 502-505.

    Hypertext Forrás: Bacteriological Analytical Manual, 8. kiadás, A változat, 1998. 12. fejezet.