Kísérleti
és terápiás
Gyógyszer

  • Journal Home
  • Jelenlegi probléma
  • Közelgő kérdés
  • Legolvasottabb
  • Legtöbbször idézett (dimenziók)
    • Az elmúlt két év
    • Teljes
  • Legtöbbször idézett (CrossRef)
    • Az elmúlt év 0
    • Teljes
  • Közösségi média
    • Múlt hónap
    • Múlt év
    • Teljes
  • Archívum
  • Információ
  • Online benyújtás
  • Információ a szerzőknek
  • Nyelv szerkesztése
  • Információ a bírálók számára
  • Szerkesztési irányelvek
  • Szerkesztőbizottság
  • Célok és hatály
  • Kivonatolás és indexelés
  • Bibliográfiai információk
  • Információ a könyvtárosoknak
  • Információ a hirdetők számára
  • Újranyomtatások és engedélyek
  • Lépjen kapcsolatba a szerkesztővel
  • Általános információ
  • A Spandidosról
  • Konferenciák
  • Munkalehetőségek
  • Kapcsolatba lépni
  • Felhasználási feltételek
  • Szerzői:
    • Qiang Gao
    • Nusheng Liang

  • Ezt a cikket a következők említik:

    Absztrakt

    Az AP etiológiája azonban bonyolult, és a betegség megfelelő terápiája továbbra is vitatott (2,17). Az akupunktúra alkalmazását a nyugati orvoslással kombinálva az AP hatékony terápiájának tekintették (18). Az AP-kezelések többségének nyilvánvaló mellékhatásai vannak (19), amelyek korlátozzák alkalmazásukat az AP kezelésében. Az integrált hagyományos kínai orvoslást (ITCM) több mint 1000 éve gyakorolják, és széles körben használják AP kezelésére, kevés mellékhatással (20–22). Jelen tanulmány egy új ITCM kezelésről számol be, amely az AP hatékony terápiája. Az ITCM AP kezelésében rejlő hatásának mechanizmusa azonban továbbra sem ismert. A kationos tripszinogént expresszáló fehérje, a szerin 1 (PRSS1) gén örökletes hasnyálmirigy-gyulladással társul, és a hasnyálmirigy akut gyulladása jellemzi (23). A SPINK1, amely az 1-es típusú Kazal-szerin proteázinhibitor kódját kódolja, egy további gén, amelyet az AP betegségmódosítójának tekintenek (24,25). Így kimutatták, hogy az AP összefügg a PRSS1 és a szerin peptidáz inhibitor, az 1-es típusú Kazal (SPINK1) expressziójával (24, 26, 27). Jelen tanulmány célja annak vizsgálata volt, hogy az ITCM javíthatja-e az AP-t a PRSS1 és a SPINK1 expressziójának szabályozásával.

    hagyományos

    Anyagok és metódusok

    Résztvevők

    Az emberi témákról szóló vizsgálati protokollokat és a beleegyezési dokumentumokat a hagyományos kínai orvoslás Yantai Kórházának (Yantai, Kína) Humán Kutatási Etikai Bizottsága hagyta jóvá. Ezenkívül írásos beleegyezési dokumentumokat szereztek be, és az adatokat a betegek magánéletét védő bizalmas tanúsítvánnyal gyűjtötték. A hagyományos kínai orvoslás jantai kórházából 2009 márciusa és 2014 márciusa között összesen 100 AP-beteget vontak be genetikai különbségeink uralma vagy megelőzése érdekében. Valamennyi beteg nem rokon, etnikai hán kínaiak voltak, hasonló kulturális és gazdasági háttérrel.

    Az AP betegeket véletlenszerűen két csoportra osztották (I. táblázat). Összesen 100 beteget (korosztály, 40–55 év) vizsgáltak, akikről beszámoltak arról, hogy AP-val szenvednek, de más bél- vagy gyulladásos betegség tünetei nem voltak. Minden támogatható eset diagnózisát szövettani vizsgálattal igazolták. A betegség lefolyása 3 óra és három nap között mozgott. A 100 esetből 48 epeúti eredetű, 40 eset túlfogyasztásból és túlzott ivásból, 12 eset pedig ismeretlen okból származott. 94 esetben a beteg először szenvedett AP-ban, míg a fennmaradó hat eset visszatérő volt.

    I. táblázat

    A beteg jellemzői az ITCM-kezelés előtt.

    I. táblázat

    A beteg jellemzői az ITCM-kezelés előtt.

    A, Férfi betegek Jellemzők Kísérleti csoport Kontrollcsoport P-értéke
    Esetek (n) 32 32 > 0,05a
    Életkor (év) 50,5 ± 4,9 50,8 ± 4,8 > 0,05b
    BMI (kg/m 2) 25,7 ± 6,1 26,0 ± 6,7 > 0,05b
    Napi kalóriabevitel (kcal) 2255 ± 377 2188 ± 409 > 0,05b
    AP besorolás (n)
    Enyhe 18. 17. > 0,05a
    Mérsékelt 8. 8. > 0,05a
    Szigorú 6. 7 > 0,05a
    B, női betegek
    Jellemzők Kísérleti csoport Ellenőrző csoport P-érték
    Esetek (n) 18. 18. > 0,05a
    Életkor (év) 46,9 ± 6,7 48,1 ± 6,9 > 0,05b
    BMI (kg/m 2) 25,1 ± 5,8 25,7 ± 5,5 > 0,05b
    Napi kalóriabevitel (kcal) 2033 ± 249 2099 ± 276 > 0,05b
    AP besorolás (n)
    Enyhe 8. 8. > 0,05a
    Mérsékelt 5. 5. > 0,05a
    Szigorú 5. 5. > 0,05a

    < label (or @symbol) needed for fn[@id='tfn4-etm-09-03-0947'] >ITCM, az integrált hagyományos kínai orvoslás; BMI, testtömeg-index; AP, akut hasnyálmirigy-gyulladás.

    Diagnosztikai kritériumok és betegségosztályozás

    Az AP a betegség súlyossága szerint enyhe, közepes vagy súlyos kategóriába sorolható (31). Az enyhe AP-betegek nem mutatnak szervi elégtelenséget, sem helyi, sem szisztémás szövődményeket. A mérsékelt AP-t átmeneti szervelégtelenség jellemzi, míg a súlyos AP-betegeknél> 48 órán át tartós szervelégtelenség mutatkozik.

    Terápiás módszerek

    A kísérleti csoportba tartozó betegeket külsőleg ITCM-készítménnyel adták be. Az ITCM készítményt a korábbi vizsgálatok (32,33) alapján állítottuk össze és készítettük el az alábbiak szerint: 30 g kínai rebarbara, 15 g Citrus aurantium, 15 g magnólia kéreg, 10 g mirabilit, 10 g Pinellia ternata, 10 g Coptis chinensis, 15 g Scutellaria baicalensis, 10 g Gardenia, 15 g Radix Paeoniae Alba, 15 g fa bazsarózsa kérge, 15 g Radix Paeoniae Rubra, 15 g Rhizoma Corydalis, 10 g Bupleurum és 10 g édesgyökér. Az anyagokat nagynyomású homogenizátorral (Jiangsu Makwell Machinery Co., Ltd., Huai’an, Kína) porra őröltük. Ezeket a porokat 500 ml vízben 200 g keményítővel feloldjuk, majd az elegyet bepároljuk és szárítjuk

    5 × 5 × 1 cm. A pasztákat az akupunktúrás pontokra (18,34), Yishu, Zhongwan, Tianshu, Zusanli, Guan Yuan és Pishu vitték fel naponta kétszer. A rebarbara és a mirabilit adagját a betegek hasi duzzanata és fájdalma súlyosságának megfelelően állították be. Ezenkívül a por összetételét a beteg tünetei, a nyelv bevonata és a pulzus függvényében módosították. A kontroll csoportba tartozó betegek akupunktúrás pontot kaptak placebo kezeléssel, amely kukoricadara, keményítő és liszt keverékét tartalmazta.

    Gyógyító standard

    Gyógyító standardot határoztak meg az ITCM kezelés hatékonyságának kategorizálása céljából. A standardot a tünetek regressziójaként határozták meg, beleértve a hasi fájdalmat és duzzanatot, lázat, hányást, valamint a széklet vagy szél átjutását. Ezenkívül a beteg hasizomfeszültségének, hasi érzékenységének, visszapattanási érzékenységének és bélhangjának javulását tekintették a sikeres terápia jelzésére. Ezenkívül a vér és a vizelet amilázszintje, valamint a rutin vér- és májfunkciós tesztek normalizálódtak, és a hasnyálmirigy-ödéma mértéke javult, összehasonlítva a korábbi hasi B-módú amerikai és CT-vizsgálatokkal. A terápiás eredmények meghatározásához a következő kategóriákat használták: Kiváló, négy nap alatt eléri a fent említett normát; hatékony, hét nap alatt éri el a fent említett színvonalat; hatástalan, nyolc nap elteltével nem sikerült elérni a normát.

    Minta izolálása

    A süllyedés által segített endoszkópos submucosalis disszekció (ESD) hatékony technika a mínusz felszíni hasnyálmirigy-szövetek eltávolítására (35); így ez a technika az előnyös megközelítés a sebészeti minták AP-betegektől történő megszerzéséhez. Az etikai kérdéseket nagyon fontosnak tartották. Kiemelt szempont volt annak biztosítása, hogy a betegek részvétele teljesen önkéntes legyen, és hogy a betegek magánélete megmaradjon. A vizsgálatot végző szakértők nem próbálták rávenni a résztvevőket bármilyen szövet adományozására, ha a résztvevőnek egyáltalán kétségei voltak a vizsgálat biztonságával vagy etikájával kapcsolatban.

    Potenciális közvetítő tényezők

    Számos zavaró tényezőről számoltak be, amelyek az AP megnövekedett kockázatával járnak (36–40). Egy korábbi metaanalízis azt mutatta, hogy az elhízás magasabb AP-kockázattal jár (41); ezért ebben a vizsgálatban a betegek testtömeg-indexét (BMI) mérték. A nemet az AP-betegek kimenetelének fontos meghatározójának is tekintették (42); így az AP-kezelés relatív női és férfi reakcióinak adatait is felmértük. Az alkoholfogyasztás növelheti az AP kockázatát (43,44); ezért az interferencia elkerülése érdekében minden alany nem ivott alkoholt, soha nem fogyasztott alkoholt. Az életkorral kapcsolatos problémák (45,46) elkerülése érdekében minden egyén 40 és 55 év közötti volt. Minden önkéntes napi háromszori étkezési gyakoriságról számolt be, és az ételfogyasztás megfelelt az egészséges skandináv élelmiszerindexnek (47,48). A kalóriabevitelt a napi kalóriabevitel saját bevallása alapján számolták ki (49).

    ELISA

    A lipáz koncentrációját ELISA módszerrel vizsgáltuk, a Wuhan Jiacheng Biotechnology Co., Ltd.-től (Wuhan, Kína) vásárolt lipáz antitestekkel. A biopsziás mintákat folyékony nitrogén segítségével őröltük. A megalapozott mintákat 1/200-mal hígítottuk foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS), és átvittük őket antitesttel bevont üregekbe. A gyártó utasításait követve az összes üreget háromszor mossuk PBS-sel, és hozzáadunk IgG-t (Immuno Pure ® peroxidázzal konjugált kecske anti-humán IgG; 21348; Beijing Jiamay Biotechnology Ltd., Peking, Kína) és 30 percig inkubáljuk. Mosás után 3,3 ', 5,5'-tetrametil-benzidint (54827-17-7; Robiot Co., Ltd., Nanjing, Kína) adtunk hozzá, és 10 percig tenyésztettük a megjelenítés céljából. Végül a keverék abszorbanciáját 450 nm-en vizsgáltuk SM600 ELISA lemezolvasóval (Shanghai Utrao Medical Instrument Co., Ltd., Shanghai, Kína). A lipáz koncentrációját egy standard kalibrátor görbe alapján számítottuk.

    Kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz láncreakció (qRT-PCR)

    A PRSS1 és a SPINK1 mRNS expressziós szintjét qRT-PCR alkalmazásával értékeltük. Az RNS-t az AP szövetekből extraháltuk GenElute ™ Mammalian Total RNS Miniprep kit (RTN10; Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, Kína) segítségével. A kezdeti cDNS-t RNS-ből amplifikáltuk véletlenszerű primer alkalmazásával. A cDNS-molekulákat templátként alkalmaztuk a PRSS1 és SPINK1 transzkriptumok qRT-PCR-jéhez egy gyors qTOWER 2.0-on (Analytik Jena AG, Thuringia, Németország). A qRT-PCR primerek a következők voltak: PRSS1 (GenBank sz. BC103998.2) szensz, 5′-AGGGGAATGAGCAGTTCATC-3 ′ és antiszensz, 5′-CACCAGAACTCAGAGTGTTG-3 ’; SPINK1 (GenBank sz. NM003122.3), sense, 5'-GAAGAGACGTGG TAAGTGCG-3 'és antiszensz, 5'-CCATCAGTCCCACAG ACAGGG-3'; GAPDH sense, 5′-CCCTTCATTGACCTCAAC TAC-3 ′ és antiszensz, 5′-CCACCTTCTTGATGTCATCAT-3 ′. GAPDH-t használtunk belső kontrollként. Az összes gént 30 ciklusos melegítéssel amplifikáltuk 30 másodpercig 94 ° C-on, majd 1 percig 60 ° C-on. A szintetizált cDNS minőségét a GAPDH mint referencia gén alkalmazásával határoztuk meg.

    A PRSS1 és a SPINK1 fehérje expressziós szintje

    A PRSS1 és a SPINK1 fehérje expressziós szintjét Western blot analízissel határoztuk meg. A fehérjét a kiválasztott AP szövetekből izoláltuk, és 12% SDS-PAGE alkalmazásával elválasztottuk. Az elválasztott fehérjét elektrotranszferrel juttattuk polivinilidén-fluorid membránokra (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA), amelyeket 5% zsírmentes száraz tejjel blokkoltunk 1 órán át, majd primer antitesttel inkubáltuk: Mouse anti humán PRSS1 monoklonális antitest (MAB3848; 1: 5000; R&D Systems China, Shanghai, Kína) és egér anti-humán SPINK1 monoklonális antitest (70R-5308; 1: 2000; Beijing Dakewei Bio-Technology Co, Ltd., Peking, Kína) ). Szekunder antitestet (egér-torma peroxidázzal konjugált; kat. Sz. 201201; 1: 10 000; Shanghai Guoyuan Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Kína) adtunk hozzá, és a kemilumineszcencia detektálást a GE Healthcare (Piscataway, NJ, USA).

    Statisztikai analízis

    A t-tesztet és a χ 2 tesztet használtuk a kísérleti és a kontrollcsoport közötti változók statisztikai szignifikanciájának kimutatására. Az adatokat SPSS 13.0 szoftver (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) és P 0,05 alkalmazásával elemeztük. Mindezeket a tényezőket kizártuk a kísérleti és a kontroll csoport között az adatgyűjtés során. Az AP egyes szakaszainak eseteinek száma hasonló volt a kísérleti és a kontroll csoport között (I. táblázat).

    Az ITCM hatása AP betegekre

    II. Táblázat

    Az AP betegek klinikai jellemzőinek összehasonlítása az ITCM kezelés előtt és után.

    II. Táblázat

    Az AP betegek klinikai jellemzőinek összehasonlítása az ITCM kezelés előtt és után.