Határok az orvostudományban

Gasztroenterológia

Ez a cikk a kutatási téma része

A krónikus májbetegségek mechanizmusai: új terápiás célok meghatározása Az összes 20 cikk megtekintése

Szerkesztette
Shannon Glaser

Texas A&M Egészségügyi Központ, Orvostudományi Főiskola

Felülvizsgálta
Yuji Naito

Kiotói prefektúra Orvostudományi Egyetem, Japán

Jose A. Uranga

Rey Juan Carlos Egyetem, Spanyolország

A szerkesztő és a lektorok kapcsolatai a legfrissebbek a Loop kutatási profiljukban, és nem feltétlenül tükrözik a felülvizsgálat idején fennálló helyzetüket.

nátriumfüggő

  • Cikk letöltése
    • PDF letöltése
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Kiegészítő
      Anyag
  • Exportálás
    • EndNote
    • Referencia menedzser
    • Egyszerű TEXT fájl
    • BibTex
OSZD MEG

Eredeti kutatás CIKK

  • 1 Gyermekgyógyászati ​​Klinika, Emory Egyetem Orvostudományi Kar, Atlanta, GA, Amerikai Egyesült Államok
  • 2 Molekuláris anyagcsere és táplálkozás részleg, Gyermekgyógyászati ​​Klinika, Groningeni Egyetem Orvosi Központ, Groningeni Egyetem, Groningen, Hollandia
  • 3 Patológiai osztály, Yerkes Nemzeti Prímkutató Központ, Emory Egyetem, Atlanta, GA, Egyesült Államok

Az alkoholmentes zsírmájbetegség (NAFLD) a világon egyre növekvő súlyos egészségügyi probléma. Korábban beszámoltunk arról, hogy az epesavak enterohepatikus keringésének megszakítása egy nem felszívódó apikális nátrium-függő epesav transzporter inhibitor (ASBTi; SC-435) alkalmazásával csökkentette a NAFLD kialakulását a magas zsírtartalmú étrendben táplált egerekben. Az ASBTi kezelés azon képessége, hogy befolyásolja a NAFLD alkoholmentes steatohepatitis (NASH) és fibrózis kialakulását étrend által kiváltott egérmodellben, továbbra sem tesztelt. A jelenlegi tanulmányban azt értékeltük, hogy az ASBTi-kezelés hepatoprotektív-e a NASH-indukált fibrózis kolinhiányos, L-aminosav-definiált (CDAA) diétamodelljében.

Mód: A hím C57Bl/6 egereket etették: (A) kolin-elegendő L-aminosavval meghatározott étrenddel (CSAA) (31 kcal% zsír), (B) CSAA diétával és ASBTi-vel (SC-435; 60 ppm), (C ) CDAA diéta, vagy (D) CDAA étrend plusz ASBTi. A testtömeget és az ételbevitelt nyomon követtük. 22 hetes étrend után mértük a hisztológiát, a koleszterin- és trigliceridszintet, valamint a génexpressziót. Meghatároztuk a széklet epesav- és zsírkiválasztását, és meghatároztuk a bél zsírfelszívódását a szacharóz-polibehenát módszerrel.

Anyagok és metódusok

Állatok

10 hetes hím C57Bl/6J egereket a Jackson Laboratories-től szereztünk be. Az állatokat csoportosan 4 egérrel helyeztük szellőztetett ketrecben (Super Mouse 750 Microisolator System; Lab Products), amelyek ágyneműt (1/8 ”Bed-O-Cobbs; Andersons Lab Bedding Products) tartalmaztak ugyanabban a hőmérsékletben (22 ° C) és fényben./sötét ciklus (12 óra; reggel 7 és 19 óra között) az állattartó létesítmény ellenőrzött helyisége a környezeti különbségek minimalizálása érdekében. Az egereket etették ad libitum 22 hétig vagy kolin-elegendő L-aminosavval meghatározott kontroll étrenddel (CSAA, katalógusszám: 518754; Dyets Inc., Bethlehem, PA, USA) vagy kolinhiányos L-aminosavval meghatározott étrenddel (CDAA, katalógus # 518753; Dyets Inc., Bethlehem, PA, USA) az ASBTi (SC-435) 0,006% (w/w) mennyiségével vagy anélkül. Ez a mennyiségű ASBTi az étrendben egy

11 mg/kg/nap SC-435 (10). A CSAA és a CDAA étrend a kalóriák 31% -át tartalmazza zsírként (kukoricaolaj és részben hidrogénezett növényi olaj formájában; zsírsavösszetétel: 23,4% telített, 52,1% egyszeresen és 24,5% többszörösen telítetlen), és nem tartalmaz hozzáadott koleszterint. Az élelmiszer-fogyasztást az új és a maradék élelmiszerek heti kétszeri lemérésével mérték. A kalóriabevitelt úgy számoltuk, hogy megszoroztuk az elfogyasztott étel tömegét a kalóriasűrűségükkel. A diéta utolsó hetében az egereket külön-külön tartottuk a zsír felszívódásának, a széklet epesavjának és a semleges szterin kiválasztásának mérésére.

Állatkísérletek

Zsírsav mérések

A szintetikus étrend kimért mintáit és a székletet metanolos NaOH-val megszappanoztuk, hexánnal extraháltuk és metil-észterekké alakítottuk át. A mintákat gázkromatográfiával (GC) elemeztük a zsírsav-metil-észterek mennyiségi meghatározásához és a behénsav (C22: 0), telített (14: 0, 16: 0, 18: 0), egyszeresen telítetlen (C18: 1) mennyiségének meghatározásához. és többszörösen telítetlen (18: 1, 18: 2, 18: 3ω3, 20: 5ω3, 22: 6ω3) zsírsavak, amint azt korábban leírtuk (21, 22). Minden kromatogramot megvizsgáltunk az alkotó zsírsavak azonosításának és a minőség-ellenőrzés érdekében.

Szövettan

A májat eltávolítottuk, lemértük, és egy részét 10% semleges pufferolt formalinban rögzítettük, paraffinba ágyazottuk, 5 μm-nél metszettük, és hematoxilinnel és eozinnal festettük. A sirius vörös festést a paraffinba ágyazott májszakaszok alkalmazásával hajtottuk végre (Picrosirius Red Stain Kit, Polysciences, Inc., Warrington, PA, USA adaptált módszer). A máj hisztológiáját vak módon értékelte egy állatorvos-patológus (S.G.) steatosis, lobularis gyulladás és hepatocelluláris balloon miatt, hogy a NAFLD Activity Score (NAS) a leírt módon származzon (23). A sirius vörös festett szakaszokat S.G. vakon értékelte az Ishak Stage esetében Ishak és mtsai. (24).

Máj- és Jejunal lipidek

A máj lipidjeit a Folch-módszeren alapuló protokoll szerint extraháltuk (25). Röviden, a lipideket kivontuk

60 mg szövetet 3 ml kloroform: metanol (2: 1) alkalmazásával, és 55 ° C-on inkubálunk legalább 2 órán át. A fázisokat 0,05% (v/v) kénsav vízben való hozzáadásával és 1500 fordulat/perc sebességgel 15 percig végzett centrifugálással osztjuk szét. Az alsó réteg egy részét átvittük, nitrogénatmoszférában szárítottuk és 2% (v/v) Triton X-100 vízben oldottuk. A teljes koleszterin (Pointe Scientific, C7510-01-906), a szabad koleszterin (Fujifilm Wako Diagnostics, Cat # 993-02501) és a triglicerid (Fujifilm Wako Diagnostics, Cat # 994-02891 és Cat # 990-02991) májkoncentrációi a következők voltak: ezt követően enzimatikus vizsgálatokkal mértük.

Génkifejezés

A teljes RNS-t izoláltuk a proximális vastagbélből és a májból miRNeasy kit alkalmazásával (Qiagen, Cat # 74106). A reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakciót (RT-PCR) 1 μg RNS-sel végeztük nagy kapacitású cDNS reverz transzkripciós készlet alkalmazásával (Applied Biosystems, Cat # 4368814). A valós idejű kvantitatív PCR-t Sybr Green master keverékkel (Applied Biosystems, Cat # 4309155) végeztük StepOne Plus valós idejű PCR rendszer (Applied Biosystems) alkalmazásával. Az mRNS expressziós szinteket a ΔΔ-CT módszer alapján számítottuk; Az értékek három párhuzamos meghatározás átlagai és az expressziót ciklofilin alkalmazásával normalizálták. A felhasznált láncindítók szekvenciáját korábban közzétették (26).

Széklet epesavak és semleges szterolok

A székletpelleteket válogattuk, levegőn szárítottuk, lemértük és mechanikusan homogenizáltuk. A semleges szterineket és az epesavakat 50 mg székletből vagy étrendből extraháltuk a leírtak szerint (27). Röviden, a mintákat 2 órán át 80 ° C-on melegítettük 1 M nátrium-hidroxid és metanol (3: 1) keverékével. A semleges szterineket ezután kétszer 2 ml petroléterrel extraháljuk és az oldattal derivatizáljuk NEM-Bisz (trimetil-szilil) -fluor-acetamid (BSTFA) -piridin-trimetil-klór-szilán (TMCS) (5: 5: 0,1). Az epesavakat kvantitatív módon extraháltuk a székletből, Sep-Pak C-18 oszlopokon izoláltuk, metanol/acetil-klorid 20: 1 arányú metilezésével és BSTFA-piridin-TMCS-sel (5: 5: 0,1) derivatizáltuk (27). Mind a semleges szterineket, mind az epesavakat gázkromatográfiával (GC) mértük (28). Az epesavak vagy semleges szterinek teljes mennyiségét az egyes fajok összegeként számoltuk ki.

Statisztikai elemzések

Az adatok középérték ± standard deviáció (SD) formájában kerülnek bemutatásra, hacsak másképp nem szerepel. Statisztikai elemzéseket végeztünk és grafikonokat készítettünk a GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) segítségével. A csoportok közötti különbségeket egyirányú ANOVA-val értékeltük Tukey-val poszt-hoc teszt, kivéve az Ishak Stage-et, amelyet Chi-Squared teszttel teszteltek. A különböző kisbetűk statisztikailag szignifikáns különbségeket jeleznek (P 0,05), és az ASBTi kezelésnek nem volt hatása a jejunális szövet trigliceridre (μg/g szövet, átlag ± SD, n = 9–12 csoportonként; CSAA: 23,2 ± 10,5; CSAA plusz ASBTi: 22,8 ± 9,2; CDAA: 29,8 ± 9,2; CDAA plusz ASBTi: 33,01 ± 10,7). A jejunális szövet teljes koleszterintartalma (μg/g szövet, átlag ± SD, n = Csoportonként 9–12) szintén nem különbözött (P > 0,05) a különböző csoportok között (CSAA: 2,5 ± 0,2; CSAA plusz ASBTi: 2,31 ± 0,23; CDAA: 2,27 ± 0,28; CDAA plusz ASBTi: 2,22 ± 0,39).

Vita

Összefoglalva, ez a tanulmány kimutatta, hogy az ASBTi-kezelés nem befolyásolta a bél zsírfelszívódását, és nem védett a májfibrózis ellen a kolinhiányos NASH egérmodellben. Mindazonáltal ezek a megállapítások hozzájárulnak az étrendi kolinhiányos egerek felhasználásának és korlátainak megértéséhez, valamint azokhoz a lehetséges mechanizmusokhoz, amelyek révén az epesavak enterohepatikus keringésének megszakítása hatással lehet a NAFLD és a NASH fejlődésére. A bélzsír felszívódásának közvetett módosítása ASBTi kezelés révén érdekes potenciális terápiás célpont. Jövőbeni vizsgálatok szükségesek a NASH különböző modelljeivel annak érdekében, hogy jobban megértsék az epesavak és a máj steatosis NASH-ba és a fibrózisra való progressziójának kapcsolatát.

Adatelérhetőségi nyilatkozat

Az ehhez a tanulmányhoz létrehozott adatkészletek kérésre rendelkezésre állnak a megfelelő szerző számára.

Etikai nyilatkozat

Az állatkísérleteket az Emory Egyetem Intézményi Állattenyésztési és Felhasználási Bizottsága felülvizsgálta és jóváhagyta.

Szerző közreműködései

AR, IP és SG elvégezték a kísérleteket, és összegyűjtötték és elemezték az adatokat. AR irányította a tanulmányt. AR, SK és PD megtervezte a vizsgálatot és megalkotta a kísérleteket. PD, IP, AR és SK írták a dolgozatot.