A málna (Rubus idaeus) megelőzése és terápiás hatása a vesekő képződésére Balbcon

A málna (Rubus idaeus) megelőzése és terápiás hatása a vesekő képződésére Balb/c egerekben

Ibrahim F. Ghalayini; Mohammed A. Al-Ghazo; Mohammad N. A. Harfeil

Urológiai osztály, King Abdullah Egyetemi Kórház, Jordán Tudományos és Műszaki Egyetem - Irbid, Jordánia

Kulcsszavak: vesekövek; Rubus idaeus; glioxilátok; kalcium-oxalát

BEVEZETÉS

A málna (Rubus idaeus), amely a Rosaceae családba tartozik, kereskedelmi gyümölcs, amelyet széles körben termesztenek a világ minden sablonrégiójában. A R. idaeus nagyon erőteljes és invazív lehet. Bazális hajtások, kiterjesztett földalatti hajtások segítségével gyökereket és egyes növényeket fejlesztenek. Széles körben elterjedt a mediterrán országokban, és Jordániában, Szíriában és Palesztinában a népi gyógyászatban használják vesekövek kezelésére. Jelen tanulmányban a R. idaeus fiatal gyökerek képességét vizsgálták terápiás szerként a vesekő képződésének megakadályozására a hiperoxaluria egérmodelljében.

ANYAG ÉS MÓDSZEREK

Kivonatok készítése

A Rubus idaeus fiatal gyökereit Na'or városából, amely Amman fővárosa közelében található, gyűjtötték össze 2007. május hónapban. Dawoud Asawi professzor, a jordániai egyetem biológiai tanszékének herbáriumi részlegének üzem-taxonológusa azonosította és tárolta. Itt 200 g fiatal gyökeret extraháltunk egy Soxhlet-extrakciós készülékben (ACMS technocracy, India) desztillált víz alkalmazásával, és rotációs bepárlón bepároltuk. A kapott szűrletet liofilizáltuk, és a liofilizátumot felhasználásig -20 ° C-on szárítószerekben tároltuk. Az átlagos (w/w) hozam 11,5% (anyakivonat).

Egérmodell a kőképzéshez

Az összes állat vizsgálata az NIH laboratóriumi állatok gondozására és felhasználására vonatkozó útmutatójának ajánlásait követte. A CaOx vesekövek kiváltására egérben a glioxilátot, amely oxalát-prekurzor, a patkányok kísérleti nephrolithiasis modelljeiben a korábban ismertetett módszerrel vezették be (9). Az intraabdominális injekciót az egyes egerek súlyának megfelelően végeztük. Negyvennyolc C57BL/6 hím egeret (8 hetes), súlya 25-30 g, felosztottunk egyenként 4, egyenként 12 egérből álló csoportba. A kontrollcsoport kivételével mindegyiknek 80 mg/kg glioxilátot adtak be napi intraabdominális injekcióval. Az ebben a vizsgálatban alkalmazott elfogadott beadási módszert Okada és mtsai előzetes kísérleteivel optimalizálták. (10) Minden állat szabad hozzáférést kapott ivóvízhez (ad libitum) és rendszeres chow-hoz minden nap, és ellenőrzött 12 órás fény/sötét ciklus alatt tartottuk 22 ± 2 ° C-on. A víz- és táplálékfelvételt minden csoportnál megmértük.

Gyógynövényes kezelés

Az állatokat 4 csoportra osztottuk. Az I. csoportot használtuk negatív kontrollként (nem kiegészítve glioxiláttal vagy gyógynövényes kezeléssel). A II. Csoport csak napi intraabdominális injekciót kapott glioxiláttal (80 mg/kg), amint azt korábban említettük. A III. És a IV. Csoport 100 mg/kg/nap és 200 mg/kg/nap vizes kivonatot kapott az R. idaeus fiatal gyökerekből a glicilát injekció mellett szondával. Az összes egeret standard laboratóriumi étrenden etették és naponta lemérték. A kísérletet a következő 12 napban végeztük. Ezután az egerek a következő teszteken estek át: szérumvizsgálatok, vizeletvizsgálatok, a vesék kalcium-meghatározása és a vesetisztológia. A szérum- és vizeletvizsgálatot háromszor megismételtük az áldozatkészítés időpontjában, különböző minták felhasználásával.

Szérum tesztek

A kísérlet végén mindegyik egeret intraperitoneális uretán injekcióval (2 g/testtömeg-kg) érzéstelenítettük. Minden állatból vért nyertünk a szérum kalcium, oxalát, foszfor és kreatinin elemzéséhez, amelyet centrifugálás után automatikus analizátorral határoztak meg. A csökkenés% -át a különböző paraméterekre a következő képlettel számítottuk ki: (kezeletlen állatok átlagértékei - kezelt állatok átlagértékei) × 100/kezelt állatok átlagértékei.

A vesekő képződésének kimutatása

Az állatok jobb veséjét eltávolítottuk és hosszirányban levágtuk. A vesemintákat 4% paraformaldehidben rögzítettük és paraffinba ágyazottuk. Négy mikrométer vastag keresztmetszetet festettünk a korábban leírt Pizzolato festési módszerrel az oxalátot tartalmazó kristályok kimutatására (11). Röviden, a paraffin szakaszokat viaszmentesítettük és desztillált vízben öblítettük. A hidrogén-peroxidot (30%) és az ezüst-nitrátot (5%) egyformán, egyenként 1 ml-rel összekevertük, és szövetlemezekkel a tárgylemezekre öntöttük (ennek az elegynek a pH-ja 6,0). Mindegyik tárgylemezt egy 60 W-os izzólámpa fényének tesszük ki 15 cm (6 hüvelyk) távolságban 15-30 percig. A tárgylemezeket alaposan desztillált vízzel mossuk, szafraninnal festjük, majd a szokásos módon dehidratáljuk. A szövetszövettanhoz vékony metszeteket készítettünk, beleértve a vesepapillát, és fénymikroszkóppal minden csoportban megfigyeltük a kristályok lerakódását és gyakoriságát a veseszövetben.

A vesék kalcium meghatározása

A bal vesét eltávolítottuk az egerekből a kalcium meghatározása céljából. A veséket 24 órán át 100 ° C-on szárítottuk és lemértük. Daráltuk egy főzőpohárba, amelyhez 7 ml 0,5 N salétromsavat adtunk. Ezután a főzőpoharat addig melegítettük, amíg a folyadék átlátszóvá nem vált. A standard kalcium-oldattal végzett kalibrálás után a kalciumtartalmat atomabszorpciós spektroszkópiával határoztuk meg. A vese kalciumtartalmát mg/g nedves vese szövetben fejeztük ki (12).

Oxidatív stressz

Az oxidatív stressz markerei a malondialdehid-tartalom (MDA) voltak, ami a tiobarbitursav-reaktív módszerrel meghatározott lipidperoxidációt (LPO) jelentette (13). A fehérje-karbonilokat Levine és munkatársai módszerével mértük. (14) E-vitaminból álló antioxidánsok, Arnuad és munkatársai módszerével meghatározva, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (15). A szuperoxid-diszmutázt (SOD) Misra és Fridovich (16) leírása szerint, a katalázt pedig Sinha (17) módszerével mértük. A Tietze (18) módszerével elemzett glutation-tartalmat és a glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz (G6PD) aktivitást Deutsch (19) módszerével határoztuk meg.

Az összes csoport eredményeit statisztikailag hasonlítottuk össze Student's-t-teszttel, P-vel

Az 1. táblázat azt mutatja, hogy statisztikailag szignifikáns csökkenést értek el a vizelet oxalát-, kalcium- és foszforértékeiben a növényekkel kezelt csoportokban a kezeletlen állatokhoz képest (P

A 2. táblázat azt mutatja, hogy a szérum oxalát, a kalcium és a kreatinin szintje szignifikánsan csökkent (17,5%, 187,8% és 19,5%) (P

A kezeletlen állatok mindegyik vese súlya szignifikánsan magasabb volt (0,27 ± 0,04 g), mint a kezelt állatoké (0,19 ± 0,03 g és 0,18 ± 0,03 g, 100 g/kg és 200 g/kg R. idaeus esetében) (o

A kalcium vesetartalmát a 3. táblázat mutatja a különböző egércsoportok esetében. Jelentősen magasabb a kezeletlen csoportban, mint a többi (P

Annak érdekében, hogy megvizsgáljuk az antioxidánsok hatását a vese hiperoxaluria által kiváltott változásaira, minden állat vérében értékeltük az enzimatikus és nem enzimatikus antioxidáns szinteket (4. táblázat). A III. És IV. Csoportba tartozó egerek 12. napján szignifikánsan több SOD-, kataláz-, glutation-reduktáz- (GSH) és G6PD-aktivitással rendelkeztek, mint a gyógynövényekkel nem kezelt csoportban (II. Csoport) (p

A veseszövet peroxidációját MDA szintként, a fehérje karbonilokat pedig a fehérje peroxidációs termékek indikátoraként becsültük meg (4. táblázat). A kezelt III. És IV. Csoport egereinek szignifikánsan alacsonyabb az MDA-szintje és a fehérje-karbonil-csoportok, mint a II. Csoportban (p

Annak kiderítése érdekében, hogy az E-vitamin védő szerepet játszhat-e a hiperoxaluria által kiváltott vese peroxidatív károsodása ellen, a veseszövet alfa-tokoferol szintjét is mértük. Amint a 4. táblázat mutatja, az R. idaeus szignifikánsan magasabb E-vitamin-tartalommal rendelkezett a növényi eredetű III. És IV. Csoportban, szemben a II.

A szövettan azt is kimutatta, hogy a kezeletlen egerek veséjének minden részében több CaOx-lerakódás tapasztalható (1B. Ábra), de a negatív kontroll és kezelt egereknél szinte nincs lerakódás (-1A, C és D ábra). A nagyobb dózisú kezelt egereknél (1D. Ábra) azonban kevesebb volt a lerakódás, mint az alacsonyabb dózissal kezelt egereknél (1C. Ábra).

A fitoterápia a népi gyógyászatban az elsődleges egészségügyi ellátás alternatívájaként sok országban általános. A R. idaeus a Rosaceae családhoz tartozó növény, amely világszerte elterjedt. A leveleket évszázadok óta használják népi gyógymódként a rákos sebek, a herpesz és az ínygyulladás kezelésére minden életkorú személynél, valamint a vérszegénység, a lábgörcsök, a hasmenés és a terhes nők reggeli betegségének kezelésére, valamint a méh relaxánsaként.

A gyógynövénygyógyászok és a lithiasisban szenvedő betegek tanúsága szerint a növény széles körben ismert arról a képességéről, hogy néhány napos kezelés után elősegíti a kövek húgyúti traktusból történő kiürítését. Tudomásunk szerint a R. idaeus hatékonyságát az urolithiasis kezelésében korábban nem értékelték. Ennek megfelelően vállaltuk a jelen tanulmányt, hogy felmérjük az R. idaeus mint CaOx-kövek megelőző szerének hatékonyságát kísérletileg kiváltott nephrolithiasisban egerekben.

Ebben a tanulmányban a hímeket választották, mert a korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy a hím egerekben a kő lerakódás mennyisége lényegesen gyakoribb volt (20). A 12 napos glioxilát beadásának időtartamára a fiatal egerek főleg CaOx-ból (9,10) álló vese-kalkulumokat képeztek.

Kis mennyiségű vizes R. idaeus kivonat beadása jelentős csökkenést okozott a fogkő növekedésében, és néhány állatban még a CaOx magot sem találták meg, ami arra utal, hogy ezek az állatok a diurézis sebességének bármilyen módosulása nélkül eliminálták a CaOx mátrixot.

Freitas et al. a népi gyógyászatban a lithiasis kezelésére használt növény Phyllanthus niruri (Pn) vizes kivonatának hatását vizsgálta a litogenezis, citrát, Mg és GAG endogén inhibitorainak vizelettel történő kiválasztására (7). Eredményeik azt mutatták, hogy a Pn gátló hatást fejt ki a kristálynövekedésre, amely független volt a citrát és az Mg vizeletürítésében bekövetkezett változásoktól, de összefüggésben állhat a GAG-ok magasabb beépülésével a kalciumba.

Atmani és Khan a Herniaria hirsutából nyert kivonat hatékonyságát vizsgálták a CaOx kristályosításán in vitro (22). A CaOx kristályok magképződését és aggregációját külön-külön mértük spektrofotometriás módszerekkel. Az eredmények azt mutatták, hogy több kristály volt az extraktum növekvő koncentrációjával, de arányosan kisebb volt. Arra a következtetésre jutottak, hogy a H. hirsuta kivonata elősegítette a CaOx kristályok magképződését, növelve számukat, de csökkentve méretüket.

Egy másik tanulmányban Atmani et al. azt javasolta, hogy a H. hirsute tartalmazhat olyan anyagokat is, amelyek feloldják a már létező részecskéket (6), amelyeket az R. idaeus kivonattal vizsgálunk egy folyamatban lévő tanulmányban. Az egerek és patkányok modelljein a viszonylag nagy kövek elérésére irányuló összes kísérlet kudarcot vallott, ezért nem állíthatjuk, hogy az R. idaeus kivonat feloldaná vagy szétszedné a CaOx kristályokat. Az R. idaeus kivonatnak a CaOx kristályok és a vese hámsejtjeivel való interakciójára gyakorolt hatásának további vizsgálata szükséges a kultúrában a kristálylerakódások megszüntetésének mechanizmusának értékeléséhez. Kísérleti vizsgálatokra van szükség ezen érdekes növény hatóanyagainak kémiai alkotóelemeinek tisztázásához.

Összegzésképpen elmondható, hogy a R. idaeus erős megelőző hatással van a CaOx-kő képződésére, megerősítve ezzel a lithiasis elleni aktivitásáról szóló folklórt. A lipidperoxidációnak szerepet játszhat a CaOx-kő képződésében, amely összefüggésben lehet a vizelet fő kockázati tényezőivel, beleértve az oxalátot, a kalciumot, a foszfort és az MDA-t. Úgy tűnik, hogy az antioxidáns terápia megakadályozhatja a CaOx kicsapódását a vesében és csökkentheti az oxalát kiválasztást kőállományban. Ezért az E-vitamin-tartalom védelmet nyújthat a CaOx-kövek lerakódása ellen az emberek veséjében. További kísérleti vizsgálatokra van szükség ezen érdekes növény hatóanyagainak kémiai alkotóelemeinek tisztázásához.

ÉRDEKLŐDÉSEK

1. Finlayson B: Szimpózium a vese lithiasisáról. A vese lithiasis felülvizsgálata. Urol Clin North Am. 1974; 1: 181-212. [Linkek]

2. Khan SR: A meszes húgyúti kövek szerkezete és fejlődése. Bonucci E (szerk.), Meszesedés a biológiai rendszerekben. Boca Raton, CRC Press. 1992; 345-63. [Linkek]

3. Khan SR: Kőalakító meszes kristályok és makromolekulák közötti kölcsönhatások. Urol Int. 1997; 59: 59-71. [Linkek]

4. Bellakhdar J, Claisse R, Fleurentin J, Younos C: A szokásos növényi gyógyszerek tárháza a marokkói gyógyszerkönyvben. J Ethnopharmacol. 1991; 35, 123-43. [Linkek]

5. Hennequin C, Lalanne V, Daudon M, Lacour B, Drueke T: Új megközelítés a kalcium-oxalát kristálynövekedés gátlóinak tanulmányozásához. Urol Res. 1993; 21: 101-8. [Linkek]

6. Atmani F, Slimani Y, Mimouni M, Hacht B: Herniaria hirsuta által végzett kalcium-oxalát kövek megelőzése kísérletileg kiváltott nephrolithiasisban patkányokban. BJU Int. 2003; 92: 137-40. [Linkek]

7. Freitas AM, Schor N, Boim MA: A Phyllanthus niruri hatása a kalcium-oxalát kristályosodás vizeletgátlóira és a vesekő képződésével kapcsolatos egyéb tényezőkre. BJU Int. 2002; 89: 829-34. [Linkek]

8. Miyaoka R, Monga M: A hagyományos kínai orvoslás alkalmazása a húgyúti kőbetegség kezelésében. Int Braz J Urol. 2009; 35: 396-405. [Linkek]

9. Khan SR: Kísérleti kalcium-oxalát nephrolithiasis és emberi húgykövek képződése. Pásztázó mikroszkóp. 1995; 9: 89-100; megbeszélés 100-1. [Linkek]

10. Okada A, Nomura S, Higashibata Y, Hirose M, Gao B, Yoshimura M és mtsai .: A kalcium-oxalát kristályok lerakódásának sikeres kialakulása egér vesében intraabdominális glyoxylate injekcióval. Urol Res. 2007; 35: 89-99. [Linkek]

11. Pizzolato P: A kalcium-oxalát hisztokémiai felismerése. J Histochem Cytochem. 1964; 12: 333-6. [Linkek]

12. Economou C. Thomus J, tombelem G, Arvis G: Predominance gauche de la lithiase renale. Sem Hop Párizs. 1987; 63, 277-80. [Linkek]

13. Buege JA, Aust SD: Mikroszomális lipidperoxidáció. Módszerek Enzymol. 1978; 52: 302-10. [Linkek]

14. Levine RL, Williams JA, Stadtman ER, E karakter: Karbonil vizsgálatok az oxidatívan módosított fehérjék meghatározására. Módszerek Enzymol. 1994; 233: 346-57. [Linkek]

15. Arnaud J, Fortis I, Blachier S, Kia D, Favier A: A retinol, az alfa-tokoferol és a béta-karotin egyidejű meghatározása a szérumban izokratikus, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával. J Chromatogr. 1991; 572: 103-16. [Linkek]

16. Misra HP, Fridovich I: A szuperoxid-anion szerepe az epinefrin autoxidációjában és a szuperoxid-diszmutáz egyszerű vizsgálata. J Biol Chem. 1972; 247: 3170-5. [Linkek]

17. Sinha AK: A kataláz kolorimetriás vizsgálata. Anal Biochem. 1972; 47: 389-94. [Linkek]

18. Tietze F: Enzim módszer a teljes és oxidált glutation nanogramm mennyiségének kvantitatív meghatározására: alkalmazás emlősök vérében és más szövetekben. Anal Biochem. 1969; 27, 502-22. [Linkek]

19. Deutsch J: Glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz. Bergmeyer HV (szerk.), Methods in Enzymatic Analysis. 3. edn. 3. kötet, New York, Academic Press. 1983; 190-7. [Linkek]

20. Prasad KV, Bharathi K, Srinivasan KK: Musa (Paradisiaca Linn. Fajta) értékelése - "Puttubale" szárlé antilitiatikus aktivitásra albínó patkányokban. Indian J Physiol Pharmacol. 1993; 37: 337-41. [Linkek]

21. Osswald H, Weinheimer G, Schutt D: A kalcium-oxalát kristályképződés hatékony megelőzése in vitro és in vivo pentozán-poliszulfáttal. Walker VR-ben, Sutton RAL, Cameron ECB, Pak CYC, Robertson WG. (szerk.), Urolithiasis. New York, Plenum Press. 1989: 141–4. [Linkek]

22. Atmani F, Khan SR: A Herniaria hirsuta kivonatának hatása a kalcium-oxalát kristályosodására in vitro. BJU Int. 2000; 85: 621-5. [Linkek]

23. Selvam R: Kalcium-oxalát kőbetegség: a lipidperoxidáció és az antioxidánsok szerepe. Urol Res. 2002; 30: 35-47. [Linkek]

24. Huang HS, Ma MC, Chen CF, Chen J: A lipid peroxidációja és összefüggései az oxalát, a citromsav és az osteopontin vizeletszintjével vesekálcium-oxalát kövekben szenvedő betegeknél. Urológia. 2003; 62: 1123-8. [Linkek]

25. Huang HS, Ma MC, Chen J: Az alacsony E-vitamin-tartalmú étrend fokozza a kalcium-oxalát kristály képződését fokozott oxidatív stressz révén patkány hiperoxalurikus vesében. Am J Physiol Renal Physiol. 2009; 296: F34-45. [Linkek]

26. Thamilselvan S, Menon M: Az E-vitamin terápia megakadályozza a hyperoxaluria által kiváltott kalcium-oxalát kristályok lerakódását a vesében, javítva a veseszövet antioxidáns állapotát. BJU Int. 2005; 96: 117-26. [Linkek]

27. Huang HS, Chen J, Chen CF, Ma MC: Az E-vitamin gyengíti a patkány vesékben a kristályképződést: a vese tubuláris sejthalálának és a kristályosodás gátlóinak szerepe. Vese Int. 2006; 70: 699-710. Erratum itt: Vese Int. 2007; 71: 712. [Linkek]

Felülvizsgálat után elfogadva: 2010. július 30

Levelezési cím:
Dr. Ibrahim Fathi Ghalayini
Urológiai professzor
P.O. Box 940165
Amman, 11194, Jordánia
Fax: +00 962 6568-7422
E-mail: [email protected]

SZERKESZTÉSI MEGJEGYZÉS

A növényi gyógyszert évszázadok óta használják a vesekövek alternatívájaként a világ különböző régióiban. Ahogy a bizonyítékokon alapuló orvoslás korába lépünk, rendkívül fontos, hogy technikai és objektív jótékony hatások mutathatók be e terápiás vonal számára, megkönnyítve annak elfogadását és gyakorlati alkalmazását (1).

Rubus ideaus ebben az elegáns műben Ghalayini et al. kimutatták, hogy képes nemcsak csökkenteni az egerek vizeletében található litogén alkotórészek (nevezetesen az oxalát) mennyiségét, hanem megszüntetni a már létező kalkuláris mátrixot akkor is, ha az állatokat folyamatos glioxilát-injekcióval tartották. A hiperoxaluria kezelése nem mindig hatékony, mivel a betegek diétás korlátozásokkal küzdenek, és nem tartják be a megfelelő orvosi terápiát, például a piridoxin beadását (2).

A Rubus idaeus megfelelő alternatívának bizonyulhat, mivel mindenütt megtalálható, és különösen, ha a főzést házilag lehet elérni. Klinikai vizsgálatok adhatják ezt a választ, valamint meghatározzák az ember számára ideális dózist, annak hatását a 24 órás vizeletelemzésre és bármilyen mellékhatás jelenlétét.

1. Miyaoka R, Monga M: A hagyományos kínai orvoslás alkalmazása a húgyúti kőbetegség kezelésében. Int Braz J Urol. 2009; 35: 396-405. [Linkek]

2. Ortiz-Alvarado O, Miyaoka R, Kriedberg C .: Piridoxin és étrendi tanácsadás idiopátiás hiperoxaluria kezelésére kőképzőkben. Urológia. 2011 [Epub a nyomtatás előtt] [Linkek]

Dr. Ricardo Miyaoka
Urológiai Sebészeti Osztály
Minnesotai Egyetem
1420 Delaware St. SE, (MMC 394)
Minneapolis MN 55455, USA
E-mail: [email protected]

A napló minden tartalmát, kivéve, ha másként jelezzük, a Creative Commons Nevezési Licenc alapján licenceljük